Innehållsförteckning:
- Nyckelskillnad - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
- Vad är Maxam Gilbert Sequencing?
- Vad är Sanger Sequencing?
- Vad är skillnaden mellan Maxam Gilbert och Sanger Sequencing?
- Sammanfattning - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Video: Skillnaden Mellan Maxam Gilbert Och Sanger Sequencing
2024 Författare: Mildred Bawerman | [email protected]. Senast ändrad: 2023-12-16 08:42
Nyckelskillnad - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Nukleotider är de grundläggande strukturella enheterna och byggstenarna i DNA. DNA-molekyl består av en polynukleotidkedja. Det finns fyra olika nukleotider som finns i DNA. Dessa nukleotider består av fyra olika kvävebaser med namnet A (adenin), G (guanin), C (cytosin), T (tymin). Nukleotidernas ordning i DNA-molekylen har stor betydelse eftersom den kodar för en viktig genetisk information för organismernas tillväxt och utveckling. DNA-sekvensering avser processen som bestämmer DNA: s exakta nukleotidsekvens. Det finns olika DNA-sekvenseringsmetoder. Maxam Gilbert-sekvensering och Sanger DNA-sekvensering är två metoder för DNA-sekvensering som tillhör första generationens sekvensering. Maxam Gilbert-sekvenseringsförfarandet bestämmer bassekvensen genom att kemiskt klyva de 5'-märkta DNA-fragmenten företrädesvis vid var och en av fyra nukleotider och gelelektrofores. Sanger-sekvenseringsförfarande bestämmer nukleotidsekvensen genom syntetisering av enkelsträngat DNA med användning av DNA-polymeras och dideoxynukleotider och gelelektrofores. Detta är nyckelskillnaden mellan Maxam Gilbert och Sanger Sequencing.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Maxam Gilbert
3. Vad är Sanger-sekvensering
4. Jämförelse vid sida - Maxam Gilbert vs Sanger-sekvensering
5. Sammanfattning
Vad är Maxam Gilbert Sequencing?
Maxam Gilbert-sekvensering, även känd som kemisk sekvenseringsmetod, är en teknik som utvecklades för att bestämma nukleotidernas ordning i DNA. Denna metod introducerades av Walter Gilbert och Alan Maxam 1976 och blev populär eftersom den kan utföras direkt med renat DNA. Maxam Gilbert-metoden tillhör den första generationen av DNA-sekvensering, och det var den första sekvenseringsmetoden som används allmänt av forskare.
Den grundläggande principen för denna metod ligger i begränsningen av de slutmärkta DNA-fragmenten vid specifika baser genom basspecifika kemikalier och betingelser och separering av de märkta fragmenten genom elektrofores såsom visas i figur 01. Fragment separeras enligt deras storlekar på gel. Eftersom fragmenten är märkta kan DNA-molekylens sekvens lätt härledas.
Maxam gilbert-metoden använder basspecifika kemikalier för att bryta DNA vid specifika baser. Två vanliga kemikalier med namnet dimetylsulfat och hydrazin-kemikalier används för att selektivt angripa puriner respektive pyrimidiner.
Maxam Gilbert sekvenseringsmetod utförs via flera steg enligt följande.
- Rening av DNA-sekvensen med restriktionsendonukleaser
- Märkning av ändarna av DNA-fragmenten genom tillsats av radioaktiva fosfater
- Rening av de märkta fragmenten från icke-märkta fragment med gelelektrofores
- Separation av det slutmärkta DNA i fyra rör och behandling med basspecifika kemikalier separat
- Elektrofores av innehållet i varje rör på separata linjer på en gel- och fragmentseparation enligt deras längd.
- Detektion av fragmenten med autoradiograf.
Figur 01: Maxam Gilbert-sekvensering
Vad är Sanger Sequencing?
Sanger Sequencing är en sekvenseringsmetod som utvecklades av Frederick Sanger och hans kollegor 1977 för att bestämma bassekvensen för ett givet DNA-fragment. Det är också känt som kedjetermineringssekvensering eller Dideoxy-sekvenseringsmetod. Denna metod fungerar på principen om selektiv införlivande av kedjeterminerande dideoxynukleotider (ddNTP) såsom ddGTP, ddCTP, ddATP och ddTTP med DNA-polymeras under syntesen av enkelsträngat DNA för att avsluta strängbildning. Dideoxynukleotider saknar 3'OH-grupper för bildandet av fosfodiesterbindningar med intilliggande nukleotid. Följaktligen stoppar strängbildningen när en ddNTP införlivas i nybildande sträng under sanger-sekvensering.
I denna metod utförs fyra separata DNA-syntesreaktioner (PCR) i fyra separata rör med en typ av ddNTP. Andra krav tillhandahålls också för rören för PCR inklusive primers, dNTP, Taq-polymeras, specifika betingelser etc. Fyra separata reaktioner utförs i fyra rör med fyra blandningar. Efter PCR-reaktioner värmedenatureras resulterande DNA-fragment och separeras med gelelektrofores. Därefter visualiseras fragmenten genom att använda antingen en märkt (radioaktiv eller fluorescerande) primer eller dNTP som visas i figur 02.
Figur 02: Sanger-sekvensering
Vad är skillnaden mellan Maxam Gilbert och Sanger Sequencing?
Skilja artikeln mitt före bordet
Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing |
|
Maxam Gilbert-sekvensering är den första tekniken som utvecklats för DNA-sekvensering. | Sanger-sekvenseringsmetod introducerades efter Maxam Gilbert-sekvenseringsmetoden. |
Användande | |
Denna metod används sällan. | Sanger-sekvensering används rutinmässigt för sekvensering. |
Användning av farliga kemikalier | |
Det använder farliga kemikalier. | Användningen av farliga kemikalier är begränsad jämfört med Maxam Gilbert-metoden. |
Märkning för upptäckt | |
Denna metod använder radioaktivt P 32 för märkning av ändarna av DNA-fragmenten. | Sanger-sekvensering använder radioaktivt eller fluorescerande märkta ddNTP. |
Sammanfattning - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Maxam Gilbert och Sanger-sekvensering är två typer av DNA-sekvenseringstekniker som omfattas av första generationens DNA-sekvensering. Maxam Gilbert-sekvensering är den första metoden som infördes för DNA-sekvensering 1976, och den utförs genom att bryta de ändmärkta DNA-fragmenten med basspecifika kemikalier. Därför är det känt som kemisk sekvensering. Sanger-sekvenseringsmetod introducerades 1977 och är baserad på ddNTP-drivna kedjetermineringsreaktioner. Sanger-sekvenseringsmetod populär än Maxam Gilbert-metoden på grund av flera nackdelar med Maxam Gilbert-metoden, såsom överdriven tidsförbrukning, användning av farliga kemikalier etc. Detta är skillnaden mellan Maxam Gilbert och Sanger-sekvensering.
Rekommenderas:
Skillnaden Mellan Clone By Clone Sequencing Och Shotgun Sequencing
Huvudskillnaden mellan klon för klonsekvensering och hagelgevärssekvensering ligger i deras uppförande. Klon efter klonsekvenseringsmetod innebär mappning
Skillnaden Mellan Kyckling Och Höna Och Pullet Och Kuk Och Cockerel Och Tupp Och Capon
Chicken vs Hen vs Pullet vs Cock vs Cockerel vs Rooster vs Capon Chicken, hen, pullet, cock, cockerel, rooster and capon, antagligen har ingen annan fågel så man
Skillnaden Mellan Microarray Och Next Generation Sequencing
Nyckelskillnad - Microarray vs Next Generation Sequencing DNA-sekvenseringsprocesser används i stor utsträckning inom bioteknik, virologi, medicinsk diag
Skillnaden Mellan Sanger Sequencing Och Pyrosequencing
Nyckelskillnad - Sanger Sequencing vs Pyrosequencing DNA sequencing är mycket viktigt för DNA-analys eftersom kunskap om rätt nukleotider ordnar
Skillnaden Mellan NGS Och Sanger Sequencing
Nyckelskillnad - NGS vs Sanger Sequencing Next Generation Sequencing (NGS) och Sanger Sequencing är två typer av nukleotidsekvenseringstekniker utvecklar