Nyckelskillnad - Gelelektrofores mot SDS-sida
Gelelektrofores är en teknik som separerar makromolekyler i ett elektriskt fält. Det är en vanlig metod inom molekylärbiologi att separera DNA, RNA och proteiner från blandningar efter deras molekylstorlek. SDS Page är en typ av gelelektrofores som används för att separera proteiner från en proteinblandning baserat på deras storlek. Gelelektrofores är en term som används för att hänvisa till den normala tekniken som används för DNA-, RNA- och proteinseparation medan SDS Page är en typ av gelelektrofores. Detta är nyckelskillnaden mellan gelelektrofores och SDS-sida.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är gelelektrofores
3. Vad är säkerhetsdatablad Sida
4. Jämförelse sida vid sida - Gelelektrofores vs SDS sida
5. Sammanfattning
Vad är gelelektrofores?
Gelelektrofores är en vanlig teknik som används i laboratorier för att separera laddade molekyler som DNA, RNA, proteiner etc. från deras blandningar. En gel används vid gelelektrofores. Det fungerar som en molekylsikt. Det finns två typer av geler som används i gelelektrofores, nämligen agaros och polyakrylamid. Val av gel- och gelpreparat är viktiga faktorer som ska beaktas i gelelektrofores eftersom porstorleken hos gelén bör manipuleras noggrant för en god separering av molekyler genom gelelektrofores. Gelelektrofores har ett elektriskt fält anslutet till två ändar av gelén. Den ena änden av gelén visar en positiv laddning medan den andra änden är negativt laddad.
DNA och RNA är negativt laddade molekyler. När de väl har laddats i gelén från den negativa änden av gelén och applicerats på det elektriska fältet, vandrar de genom gelporerna mot den positivt laddade änden av gelén. Migreringshastigheten beror på laddningen och molekylens storlek. Mindre molekyler migrerar lätt genom gelporerna än större molekyler. Följaktligen reser mindre molekyler ett långt avstånd genom gelén och de större molekylerna reser ett kort avstånd. För att observera molekylernas rörelse på gelén används speciella typer av färgämnen. Det elektriska fältet appliceras under en viss tidsperiod och stoppas för att förhindra förlust av molekyler och för att hålla molekylerna i sina färdiga positioner. Olika band kan observeras i gelén. Dessa band representerar molekylerna i olika storlekar. Därmed,gelelektrofores är användbar för att differentiera molekyler efter deras storlek.
Gelelektrofores införlivas i olika tekniker som en preparativ teknik i molekylärbiologi såsom PCR, RFLP, kloning, DNA-sekvensering, södra blotting, genommappning etc.
Figur 01: Agarosgelelektrofores
Vad är SDS-sidan?
Natriumdodecylsulfatpolyakrylamidgelelektrofores (SDS-sida) är en typ av gelelektrofores som används för att separera proteiner. När gelelektrofores används för att separera proteiner behövs särskilda behandlingar eftersom proteiner inte är negativt laddade som DNA och RNA och inte migrerar mot den positiva änden eller den negativa änden. Följaktligen denatureras proteiner och beläggs med en negativ laddning före gelelektrofores. Det görs med hjälp av ett tvättmedel som kallas natriumdodecylsulfat (SDS). Gelelektroforesen som använder SDS och en polyakrylamidgel för stödmediet är känd som SDS Page. Denna teknik används ofta inom biokemi, genetik, kriminalteknik och molekylärbiologi.
Under SDS-sidan blandas proteiner med SDS. SDS fäller ut proteiner i linjär form och täcker dem med en negativ laddning som är proportionell mot deras molekylära massa. På grund av den negativa laddningen migrerar proteinmolekyler mot gelens positiva laddningsände och separeras enligt deras molekylmassa. På SDS-sidan används polyakrylamid som det fasta stödet för gelén. Den faktiska separationen av proteinerna beror huvudsakligen på gelens egenskaper. Därför bör polyakrylamidgelberedning göras noggrant och korrekta koncentrationer av polyakrylamid bör användas. Polyakrylamidgeler har hög upplösning än agarosgeler. Därför anses SDS Page vara en teknik med hög upplösning för proteinseparation.
SDS Page är en typ av denaturerande gelelektrofores. Det har en stor begränsning i proteinanalys. Eftersom SDS denaturerar proteiner före separation tillåter det inte detektering av enzymatisk aktivitet, proteinbindningsinteraktioner, proteinkofaktorer etc.
Bild 02: Säkerhetsdatablad
Vad är skillnaden mellan gelelektrofores och SDS-sida?
Gelelektrofores vs SDS-sida |
|
| Gelelektrofores är en metod som utförs för att separera makromolekyler med hjälp av ett elektriskt fält. | SDS Page är en högupplöst gelelektroforesteknik som används för att separera proteiner baserat på deras massa. |
| Gel Run | |
| Det kan utföras horisontellt eller vertikalt. | SDS-sidan körs alltid vertikalt. |
| Grund för separering | |
| Separation sker enligt laddning och storlek. | Proteinseparation sker enligt massa och laddning. |
| Upplösning | |
| Agarosgelelektrofores har låg upplösning och polyakrylamidgelelektrofores har högre upplösning | SDS Page har en bättre upplösning. |
| Denaturering | |
| Gelelektrofores innefattar både denaturerande och icke-denaturerande tekniker. | SDS Page denaturerar proteiner före separation. |
Sammanfattning - Gelelektrofores vs SDS-sida
Gelelektrofores är en vanlig teknik som används för separation och analys av DNA, RNA och proteiner baserat på deras storlek och laddning. Det finns två huvudtyper av gelelektrofores, nämligen agarosgelelektrofores och polyakrylamidgelelektrofores. Agarosgeler används huvudsakligen för nukleinsyraseparation; när högre upplösning krävs, används polyakrylamidgeler. SDS Page är en typ av gelelektrofores som ofta används för att separera komplexa blandningar av proteiner. Det betraktas som en högupplöst proteinseparationsteknik. Detta är skillnaden mellan gelelektrofores och SDS-sida.
