Nyckelskillnad - Horisontell mot vertikal gelelektrofores
Gelelektrofores är en laboratorieteknik som används i genetik för att separera blandningar som innehåller DNA, RNA och andra proteiner enligt deras respektive laddning och molekylstorlek. DNA, RNA eller proteiner som behöver separeras i denna metod körs genom en gel som innehåller små porer. Molekylerna drivs genom gelén av ett elektriskt fält. Molekylerna passerar genom gelens porer och rörelsens hastighet är omvänt proportionell mot deras respektive längder. Därför kommer molekyler med lägre molekylstorlek att röra sig snabbare än molekyler med högre molekylvikt. Det elektriska fältet genereras av laddningsskillnaden vid gelens två ändar. Den ena änden innehåller en positiv laddning och den andra änden innehåller en negativ laddning. Eftersom DNA- och RNA-molekyler är negativt laddade,de kommer att lockas mot den positivt laddade änden av gelén. Gelelektrofores kan ha två olika metoder: horisontell gelelektrofores och vertikal gelelektrofores. Vid horisontell gelelektrofores är gelén närvarande i en horisontell orientering och är nedsänkt i en kontinuerlig löpbuffert som finns inuti själva gelboxen. Vid vertikal gelelektrofores är buffersystemet orienterat vertikalt och är diskontinuerligt med två kamrar på toppen respektive botten med en katod respektive en anod. Detta är nyckelskillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores.gelén är närvarande i en horisontell orientering och är nedsänkt i en kontinuerlig löpande buffert som finns i själva gelboxen. Vid vertikal gelelektrofores är buffersystemet orienterat vertikalt och är diskontinuerligt med två kammare närvarande på toppen och botten med en katod respektive en anod. Detta är nyckelskillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores.gelén är närvarande i en horisontell orientering och är nedsänkt i en kontinuerlig löpande buffert som finns inne i själva gelboxen. Vid vertikal gelelektrofores är buffersystemet orienterat vertikalt och är diskontinuerligt med två kamrar på toppen respektive botten med en katod respektive en anod. Detta är nyckelskillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är horisontell gelelektrofores
3. Vad är vertikal gelelektrofores
4. Likheter mellan horisontell och vertikal gelelektrofores
5. Jämförelse sida vid sida - Horisontell vs vertikal gelelektrofores i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är horisontell gelelektrofores?
Horisontell gelelektrofores använder den grundläggande teorin för separation av DNA-, RNA- eller proteinmolekyler enligt deras respektive molekylstorlek och laddning. I denna teknik är gelén närvarande i en horisontell orientering och är nedsänkt i en buffert som är kontinuerlig. Agarosgel används för att separera gelboxen i två fack. Den ena änden av gelboxen innehåller en anod medan den andra änden innehåller en katod. När en ström appliceras tillåter bufferten som används i denna teknik skapandet av en laddningsgradient. När laddningen appliceras tenderar gelén att värmas upp. Bufferten fungerar också som kylvätska som håller temperaturen på optimala nivåer. Återcirkulation av den löpande bufferten förhindrar bildandet av en pH-gradient. Ett diskontinuerligt buffersystem kan inte användas i horisontell gelelektrofores eftersom de två facken i gelsystemet ansluts till den löpande bufferten. Akrylamid används under gelelektrofores för att separera proteinblandningar.
Figur 01: Horisontell gelelektrofores
Vid horisontell gelelektrofores kan akrylamid inte användas eftersom gelboxen utsätts för syre. På grund av närvaron av syre inhiberas polymerisation av akrylamid och detta stör bildandet av gelén. Horisontell gelelektrofores är en enkel metod som används vid separering av DNA och RNA.
Vad är vertikal gelelektrofores?
Vertikal gelelektroforesteknik fungerar enligt den primära teorin om gelelektrofores, men den anses vara mer komplex än horisontell gelelektroforesmetod. Denna teknik använder en diskontinuerlig buffert. En katod är placerad i den övre kammaren och anoden är placerad i den nedre kammaren. Elektroderna i varje fack ger det erforderliga elektriska fältet. Ett tunt lager gel hälls mellan de två monterade glasplattorna. Därför är den översta delen av gelén nedsänkt i den övre kammaren och den nedre delen av gelén är nedsänkt i kammaren längst ner. När strömmen är applicerad rör sig en liten del av bufferten till bottenkammaren från den övre kammaren genom gelén. Strömmen som tillämpas i denna teknik är av små enheter.
Figur 02: Vertikal gelelektrofores
Vid vertikal gelelektrofores flyter buffert endast genom gelén. Detta möjliggör noggrann kontroll av spänningsgradienten under separationssteget. Akrylamidgel kan användas eftersom facken inte utsätts för atmosfäriskt syre. På grund av akrylamidgelens mindre porstorlek kan exakt separation uppnås med en högre upplösning.
Vad är likheterna mellan horisontell och vertikal gelelektrofores?
- Båda systemen fungerar enligt den grundläggande teorin om gelelektrofores.
- Anod och katod används för att tillhandahålla det nödvändiga elektriska fältet i båda systemen.
Vad är skillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores?
Skilja artikeln mitt före bordet
Horisontell vs vertikal gelelektrofores |
|
| Horisontell gelelektrofores är en gelelektroforesteknik där gelén är närvarande i en horisontell orientering. | Vertikal gelelektrofores är en gelelektroforesteknik där gelén är orienterad vertikalt. |
| Buffert | |
| Horisontell gelelektrofores består av en kontinuerlig buffert. | Den löpande bufferten är diskontinuerlig i vertikal gelelektrofores. |
| Användning av akrylamid | |
| Akrylamid kan inte användas för horisontell gelelektrofores eftersom gelboxen utsätts för atmosfäriskt syre. | Eftersom gelén inte utsätts för atmosfäriskt syre på grund av två separata kamrar, kan akrylamid användas för vertikal gelelektrofores. |
| Fungera | |
| Horisontell gelelektrofores används oftare för separering av DNA- och RNA-blandningar men inte proteiner. | Vertikal gelelektrofores används för att separera proteinblandningar. |
Sammanfattning - Horisontell vs Vertikal gelelektrofores
Gelelektrofores är laboratorieteknik som används i stor utsträckning vid separering av blandningar som innehåller molekyler av DNA, RNA och proteiner. Det finns två metoder för gelelektrofores: horisontell och vertikal gelelektrofores. I horisontell gelelektrofores är den löpande bufferten kontinuerlig medan den i vertikal gelelektrofores är diskontinuerlig. Detta är skillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores. Båda systemen fungerar enligt den gemensamma principen för gelelektrofores.
Ladda ner PDF-version av Horisontell vs Vertikal gelelektrofores
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-version här Skillnaden mellan horisontell och vertikal gelelektrofores.
