Nyckelskillnad - Phusion vs Taq Polymerase
DNA-polymeraser används i stor utsträckning enzymer i molekylärbiologiska tekniker och är också naturligt närvarande i alla organismer som genomgår DNA-replikering. De är de viktigaste polymeriserande enzymerna som involverar under replikering. DNA-polymeras har förmåga att tillsätta nukleotider till den fria 3'-änden av DNA-strängen och därigenom orsaka förlängning av en ny sträng. För närvarande, på grund av utvecklingen av molekylärbiologi inom sjukdomsdiagnostik och industriella tillämpningar, är det viktigt att tillverka polymeraser med olika fördelaktiga egenskaper. Detta ökar metodens noggrannhet och gör den till en snabbare teknik. Fusion och Taq-polymeras är två kommersiellt producerade termostabila polymerasenzymer som används i speciella molekylära applikationer. Fusion är ett DNA-polymeras isolerat från Pyrococcus furiosus och används huvudsakligen i kloningsexperiment för att öka trovärdigheten. Taq DNA-polymeras är det vanliga DNA-polymeraset som används i Polymerase Chain Reaction (PCR), och det isoleras från den termostabila bakterien. Thermus aquaticus. Huvudskillnaden mellan de två enzymerna är källmikroorganismen. Fusion isoleras från extremofilen, Pyrococcus furiosus, medan Taq-polymeras isoleras från termofilen, Thermus aquaticus. Taq-polymeras isoleras från termofilen Thermus aquaticus. Taq-polymeras isoleras från termofilen Thermus aquaticus.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är Phusion
3. Vad är Taq Polymerase
4. Likheter mellan Phusion och Taq Polymerase
5. Jämförelse sida vid sida - Phusion vs Taq Polymerase i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är Phusion?
Phusion DNA-polymeras är ett nytt polymeras som tillverkas genom att isolera enzymet från Pyrococcus furiosus, som är en extremofil Archaea. Dessa mikrober ligger under extremt höga temperaturförhållanden, vilket gör polymeraset till ett mycket värmestabilt polymeras. Fusionspolymeras används för att erhålla extrem trohet över det konventionella termostabila polymeraset; Taq-polymeras. Fusionspolymeras kan amplifiera långa mallar upp till 7,5 kb genomiskt DNA. Den optimala polymerisation kapacitet Phusion polymeraset är vid 72 0 C. Phusion används också vid kloning produkter för sekvensering, expressionsanalys och mutationsanalys.
Fusions-DNA-polymeras har 3 '- 5' exonukleasaktivitet. Detta möjliggör korrekturläsning av den nyligen syntetiserade strängen efter syntesen. Följaktligen kan nukleotidmatchningarna lätt repareras. Således har den en lägre felfrekvens. Övergripande fördelar med Phusion-polymeras är;
- Extrem Fidelity
- Hög hastighet och reducerad förlängningstid
- Robusta reaktioner och kräver minimal optimering
- Högt utbyte
Figur 01: Fusion
Den största nackdelen med Phusion-polymeras är att det inhiberas i närvaro av deoxiuridintrifosfat (dUTP). När dUTPs ackumuleras i reaktionsblandningen kan det hämma verkningarna av Phusion-polymeras. Detta förhindras genom att behandla reaktionsblandningen med dUTPase innan enzymet tillsätts. För närvarande används en dUTP-resistent variant av Phusion-polymeras som kallas Pfu Turbo istället för Phusion-polymeras som ett botemedel mot detta problem.
Vad är Taq Polymerase?
Taq DNA-polymeras-uppfinningen har revolutionerat området molekylärbiologi. Det löste ett stort problem i DNA-amplifiering. Taq DNA-polymeras är ett värmestabilt polymerasenzym extraherat och isolerat från den termofila bakterien, Thermus aquaticus. Upptäckten av dessa enzymer leder till utvecklingen av PCR. Detta enzym har tillåtit användning av polymeraskedjereaktion vid DNA-amplifiering istället för konventionella mödosamma kloningstekniker. PCR används nu inom molekylär diagnostik, jordbruks- och industrifält med många nya variationer till tekniken.
Figur 02: Taq-polymeras
Taq DNA-polymeras fungerar vid det optimala temperaturområdet mellan 72 ° C - 80 ° C. Taq DNA-polymeras kräver en samfaktor; magnesium för dess funktion. Taq-polymeras har inte 3 '- 5'-korrekturförmågan, därför är felfrekvensen för Taq DNA-polymeras hög jämfört med fler nyare typer av DNA-polymeraser, såsom Phusion-polymeras etc. samma över hela vetenskapens värld på grund av enzymets bekvämlighet och flexibilitet.
Vad är likheterna mellan Phusion och Taq-polymeras?
- Både Phusion- och Taq-polymerasenzymer är polymeriserande enzymer som kan tillsätta nukleotider till den 3'-fria änden av DNA-strängen.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser kräver en primersekvens för att initiera polymerisation.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser är värmestabila.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser används i PCR-mekanismer för att amplifiera DNA.
- När polymeras tillsätts till reaktionsblandningen tillsättes både Phusion- och Taq-polymeraser sist för att säkerställa enzymets effektivitet.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser syntetiseras kommersiellt för molekylärbiologiska experimentella ändamål.
- Både Phusion- och Taq-polymeraser kräver en kofaktor för att slutföra sin funktion.
Vad är skillnaden mellan Phusion och Taq Polymerase?
Skilja artikeln mitt före bordet
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Fusion är ett DNA-polymeras isolerat från Pyrococcus furiosus och används huvudsakligen i kloningsexperiment för att öka trovärdigheten. | Taq DNA-polymeras är det vanliga DNA-polymeraset som används i Polymerase Chain Reaction (PCR), och det isoleras från den termostabila bakterien Thermus aquaticus. |
| Källorganism | |
| Fusion extraheras från extremofil archaea - Pyrococcus furiosus. | Dessa litterära verk sträcker sig från kolonisationsperioden till avkoloniseringsperioden. |
| Korrekturläsningsförmåga | |
| 3 '- 5' korrekt läsförmåga finns i Phusion. | 3 '- 5' bevisavläsningsförmåga saknas i Taq-polymeras. |
| Trohet | |
| Hög trohet finns med Phusion. | Taq-polymeras visar låg trohet. |
| Förstärkning | |
| Fusion kan förstärka långa DNA-fragment. | Taq-polymeras kan amplifiera mycket kortare DNA-fragment. |
| dUTP Förgiftning | |
| Fusionsåtgärder hämmas av den udda ackumuleringen. | Taq-polymeras hämmas inte av dUPT. |
Sammanfattning - Phusion vs Taq-polymeras
Fusion och Taq DNA-polymeras är två värmestabila polymeraser som används i PCR-tekniker. Fusion är ett polymeras isolerat från extremophilen, Pyrococcus furiosus, medan Taq isoleras från de termostabila bakterierna Thermus aquaticus. Taq DNA-polymeras upptäckt leder till PCR-uppfinningen. Phusion har många fördelar jämfört med Taq, vilket har gjort Phusion till ett bättre alternativ när det gäller att producera högkvalitativt DNA. Emellertid används Taq-polymeras fortfarande som standardpolymerasenzym i PCR. Detta är skillnaden mellan Phusion och Taq-polymeras.
