PCR vs PCR i realtid
PCR- eller polymeraskedjereaktion är en revolutionerad upptäckt inom modern molekylärbiologi, som först utvecklades av kemisten Kary Mullis 1983. Det gör det möjligt att förstärka en enda sekvens i ett komplext DNA för analys. Den grundläggande idén med PCR är att två primers, som är komplementära till motsatta strängar i en DNA-sekvens, är orienterade mot varandra; primrarna producerar komplementära strängar, var och en innehåller den andra primern. Följaktligen är resultatet en stor mängd av en sekvens som motsvarar DNA som ligger mellan de två primrarna. DNA-polymerasenzym används för att förlänga primrarna i PCR. DNA-polymeras är ett termostabilt enzym och har förmågan att överleva vid höga temperaturer (94 till 95 ° C) som används för denaturering av mall-DNA.
PCR involverar tre steg, nämligen upprepade rundor av denaturering, glödgning av primers och syntes av DNA. En termocykelmaskin används för att utföra denna reaktion så att den kan programmeras för att ändra temperaturerna snabbt och exakt. Användning av PCR är brottsutredningar, DNA-fingeravtryck, detektion av patogener och analys av DNA från tidiga mänskliga arter.
Vad är konventionell PCR?
Det finns tre huvudstadier av konventionell PCR, nämligen; DNA-amplifieringssteg, separation av PCR och detektion av produkter. Separation av DNA-segment görs typiskt med agarosgelelektrofores. Produkterna färgas sedan med etheiduimbromid. Slutligen uppnås detektering genom visualisering av band på geler under UV-ljus. Därför uttrycks de slutliga resultaten av konventionell PCR inte som siffror. Normalt kan konventionell PCR bara detektera en enda parameter.
Vad är PCR i realtid?
Realtids-PCR kan detektera förstärkning av produkter när produkterna syntetiseras. Med utvecklingen av teknik har PCR blivit en mycket populär teknik, särskilt för detektion och identifiering av bakterier i livsmedel. Realtids PCR använder ett fluorescerande färgsystem och termocykler utrustad med fluorescerande detekteringsförmåga.
Vad är skillnaden mellan konventionell PCR och realtids PCR?
• Konventionell PCR är mer tidskrävande eftersom den använder gelelektrofores för att analysera de förstärkta PCR-produkterna. Däremot är PCR i realtid mindre tidskrävande eftersom det kan detektera förstärkningar under de tidiga faserna av reaktionen.
• PCR i realtid samlar in data vid den exponentiella tillväxtfasen av PCR medan traditionell PCR samlar in data vid reaktionens slutpunkt.
• Slutresultaten för konventionell PCR är kanske inte särskilt exakta, men resultaten av PCR i realtid är mycket exakta.
• PCR i realtid är känsligare än konventionell PCR.
• Konventionell PCR har mycket dålig upplösning medan PCR i realtid kan upptäcka mycket små förändringar på grund av den höga upplösningen.
• Slutpunktsdetektering av konventionell PCR har kort dynamiskt omfång medan PCR-detektering i realtid har stort dynamiskt omfång.
• Till skillnad från konventionell PCR finns automatiserade detekteringstekniker i PCR i realtid.
• Konventionell PCR är mycket sofistikerad och arbetsintensiv mer än PCR i realtid.
• Till skillnad från PCR i realtid kan konventionell PCR inte skilja mellan döda och levande bakterier.
• PCR i realtid använder fluorescerande färgsystem för att detektera produkterna medan konventionell PCR använder etidiumbromid och UV-ljus för att visualisera band i agarosgelmediet.
