Nyckelskillnad - Säkerhetsdatablad mot Western Blot
Western blotting är en teknik som detekterar ett specifikt protein från ett proteinprov. Denna teknik utförs via flera viktiga steg: gelelektrofores, blotting och hybridisering. Natriumdodecylsulfatpolyakrylamidgelelektrofores (SDS-sida) är en slags gelelektroforesteknik som används för att separera proteiner efter deras storlek (molekylvikter). Western blot är ett specialark av ett blottingmembran som används för att överföra samma mönster av proteinerna i SDS-sidan. Huvudskillnaden mellan SDS-sida och western blot är att SDS-sida möjliggör separering av proteiner i en blandning medan western blot möjliggör detektion och kvantifiering av ett specifikt protein från en blandning. Båda är användbara i proteinanalysstudier.
INNEHÅLL
1. Översikt och viktig skillnad
2. Vad är säkerhetsdatablad sidan
3. Vad är Western Blot
4. Jämförelse sida vid sida - SDS-sida jämfört med Western Blot
5. Sammanfattning
Vad är SDS-sidan?
SDS Page är en gelelektrofores-teknik som används för proteinseparation. Det används ofta inom biokemi, genetik, kriminalteknik och molekylärbiologi. När proteinerna extraherats från provet körs de på en gel bestående av SDS och polyakrylamid. SDS är ett anjoniskt rengöringsmedel som används för att linearisera proteiner (denatureringsproteiner) och för att ge en linjär protein som är negativ laddning som är proportionell mot deras molekylvikt. Polyakrylamid blir det fasta stödet för gelén. Denaturerade proteiner som är negativt laddade migrerar mot den positiva änden av apparaten genom gelén. Enligt proteinernas storlekar skiljer migreringshastigheterna mellan proteinerna och separering sker. Därför är SDS-sidan användbar för separering av enskilda proteiner baserat på deras storlek.
Framställningen av polyakrylamidgel för fraktionering av proteiner är ett avgörande steg i SDS-sidan. Den korrekta koncentrationen av polyakrylamid och typen av tvärbindningsmedel som används påverkar starkt de fysiska egenskaperna hos gelén, vilket gör den faktiska separationen av de olika proteinerna. Porstorlekarna på gelén bör hanteras ordentligt för effektiv separation. Emellertid betraktas SDS Page som en högupplöst proteinseparationsteknik.
SDS Page-teknik har en stor begränsning i proteinanalys. Eftersom SDS denaturerar proteiner före separation tillåter det inte detektering av enzymatisk aktivitet, proteinbindningsinteraktioner, proteinkofaktorer etc.
Bild 01: Säkerhetsdatablad
Vad är Western Blot?
Western blotting-teknik möjliggör detektion av ett specifikt protein från en proteinblandning och mätning av proteinets kvantitet och molekylvikt. Western blot är det membran som används under blottingproceduren för att få spegelbilden av proteinmönstren i SDS-polyakrylamidgel. Membranet som används för western blotting består mestadels av nitrocellulosa eller polyvinyliden difluorid (PVDF). Membranet med det överförda proteinet kan användas för att identifiera önskat protein. Det kräver högkvalitativ antikropp för detektion av det önskade proteinet genom hybridisering. Antikroppen binder till sitt specifika antigen och avslöjar närvaron av det önskade antigenet som är ett protein.
Överföring av proteinerna från SDS-polyakrylamidgel till western blot utförs genom elektroblotting. Det är en effektiv och snabb metod som får proteinerna att elektroforesera ur gelén och passera på nitrocellulosamembranet (Western blot).
Figur 02: Western Blot
Vad är skillnaden mellan SDS-sidan och Western Blot?
Skilja artikeln mitt före bordet
SDS-sida mot Western Blot |
|
| SDS Page är en gelelektrofores teknik. | Western blot är en teknik som utförs på ett membran för att detektera ett specifikt protein från en blandning. |
| Använda sig av | |
| SDS-sidan tillåter separering av proteiner beroende på deras storlek. | Western blot möjliggör överföring av proteiner på SDS-gel utan att ändra dess mönster och möjliggör hybridisering med specifika antikroppar. |
| Nackdelar | |
| Protein denaturering, hög kostnad och närvaro av neurotoxin kemikalier är nackdelarna med denna teknik. | Denna teknik är tidskrävande och kräver goda personliga och specifika kontrollerade förhållanden. |
Sammanfattning - SDS-sida vs Western Blot
SDS-sida och western blot är två metoder som är involverade i proteinanalys. SDS Page möjliggör enkel separation av proteiner på en gel beroende på deras molekylvikt. Western blot hjälper till att bekräfta närvaron och mängden av ett specifikt protein genom hybridisering med specifika antikroppar. Det här är skillnaden mellan SDS-sidan och Western blot.
