Nyckelskillnad - Immunfluorescens mot immunhistokemi
Sjukdomsdiagnostik, som använder molekylärbiologiska metoder, har blivit ett framväxande område inom klinisk laboratorieteknik. Den innehåller alla tester och metoder för att identifiera en sjukdom och förstå orsaken till en sjukdom genom att analysera DNA, RNA eller uttryckta proteiner i en organism. Snabba framsteg inom molekylär diagnostik har möjliggjort grundläggande forskning om smittsamma och icke-smittsamma sjukdomar. Dessa används för att bestämma förändringar i sekvens- eller uttrycksnivåer i viktiga gener eller proteiner som är involverade i sjukdom. Immunofluorescens (IF) och Immunohistochemistry (IHC) är två sådana allmänt använda tekniker inom cancerbiologi. IF är en typ av IHC där en fluorescensdetekteringsmetod används för att analysera monoklonala och polyklonala antikroppar, medan IHC använder kemiska baserade metoder för att detektera de monoklonala och polyklonala antikropparna. Detta är nyckelskillnaden mellan IF och IHC.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är immunfluorescens
3. Vad är immunhistokemi
4. Likheter mellan immunfluorescens och immunhistokemi
5. Jämförelse sida vid sida - Immunofluorescens mot immunhistokemi i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är immunfluorescens (IF)?
Immunfluorescens är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med hjälp av fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektionsändamålet. Märkta sekundära antikroppar kan resultera i oönskade bakgrundssignaler; därför är IF-tekniken baserad på märkning av den primära antikroppen för närvarande för att undvika oönskade signaler under detektering. Genom denna teknik förhindras icke-specifik bindning mellan den primära och den sekundära antikroppen, och den är snabbare eftersom det inte finns något sekundärt inkubationssteg involverat. Datakvaliteten förbättras också.
Figur 01: Dubbel immunofluorescensfärgning för BrdU, NeuN och GFAP
Fluorokromer eller fluorescerande färgämnen är föreningar som kan absorbera strålning, företrädesvis ultraviolett strålning som exciteras. När partiklarna når marktillståndet från det exciterade tillståndet avger de strålning som fångas upp och detekteras av en detektor för att bilda ett spektrum. Det är av stor vikt att den fluorescerande märkningen är kompatibel och stabil för den specifika reaktionen och att den bör konjugeras ordentligt till antikroppen för att uppnå exakta resultat. En av de mest använda fluorokromerna är fluoresceinisotiocyanat (FITC), som har grön färg, med absorptions- och emissionstoppvåglängder på 490 nm respektive 520 nm. Rhodamine, ett annat medel som används i IF, har röd färg och har distinkta våglängder för absorption och emission av 553 nm och 627 nm.
Vad är immunhistokemi (IHC)?
IHC är en molekylär testmetod som praktiseras för att identifiera och bekräfta närvaron av antigenet i målcellen. Målcellen kan vara en infektiös partikel, en mikrobiell patogen eller en malign tumörcell. IHC använder monoklonala och polyklonala antikroppar för att bestämma närvaron av antigener närvarande på cellytan hos målcellerna. Tekniken baseras på antigen-antikroppsbindning. En detektionsmarkör är konjugerad till dessa antikroppar för att detektera närvaron eller frånvaron av det specifika antigenet. Dessa markörer kan vara kemiska markörer såsom enzymer, fluorescerande märkta antikroppar eller radiomärkta antikroppar.
Figur 02: Mus-hjärnskiva färgad av immunhistokemi
Den mest populära applikationen av IHC är inom cancercellbiologi för att identifiera förekomsten av maligna tumörer, men det används också för detektion av infektionssjukdomar.
Vad är likheterna mellan immunfluorescens och immunhistokemi?
- Immunfluorescens och immunhistokemi sker under in vitro-förhållanden.
- Båda teknikerna är baserade på antigen-antikroppen
- Båda är mycket snabba tekniker.
- Resultaten av teknikerna är reproducerbara.
- Båda har förbättrad datakvalitet.
- Dessa tekniker används vid diagnostik för cancer och infektionssjukdomar.
Vad är skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi?
Skilja artikeln mitt före bordet
Immunofluorescens vs immunhistokemi |
|
| IF är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med hjälp av fluorescerande färgämnen eller fluorescerande proteiner för detektion. | IHC är en detekteringsteknik där antikropparna som används i analysen är märkta med kemikalier eller radioaktiva element för detektion. |
| Noggrannhet | |
| Noggrannheten är högre i IF-tekniken jämfört med IHC. | Noggrannheten är lägre i IHC. |
| Specificitet | |
| IF är mer specifik. | IHC är mindre specifik. |
Sammanfattning - Immunofluorescens vs Immunhistokemi
Molekylära mekanismer har lett till många förändringar inom medicinområdet, vilket har lett till avancerade molekylära testmetoder som har lett till revolutioner inom diagnostikområdet. Dessa uppfinningar har lett till en snabb och korrekt identifiering och bekräftelse av sjukdomen, vilket möjliggör framgångsrik administrering och produktion av läkemedel. Dessa tekniker används också i farmakologi för att hitta läkemedlets mål och för att bekräfta läkemedlets farmakokinetiska egenskaper under läkemedelsmetabolism. IF och IHC är två diagnostiska metoder som bygger på konceptet antigen- och antikroppsbindning, även om detektionsmetoden i båda teknikerna skiljer sig åt. IF använder principen om fluorescens för att detektera antigenet och IHC använder begreppet kemisk konjugering för att detektera antigenet. Detta är skillnaden mellan IF och IHC.
Ladda ner PDF-version av immunfluorescens vs immunhistokemi
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Vänligen ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan immunfluorescens och immunhistokemi.
