Nyckelskillnad - Nitrocellulose vs nylonmembran
Blotting är en viktig teknik för detektion av specifika sekvenser av DNA, RNA och proteiner från deras blandningar i molekylärbiologi. Det görs med hjälp av ett membran som kallas blot. Det finns olika blottingtekniker som norra, södra och västra blotting. Att välja ett lämpligt membran för blottingprocessen bör göras noggrant för att förhindra ospecifik bindning och fel upptäckt. Nitrocellulosa, nylon och PVDF är vanligt förekommande membran vid blottingtekniker. De har olika egenskaper. Huvudskillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran är att nitrocellulosamembran har hög potential för immobilisering av proteiner medan nylonmembran har hög nukleinsyraimmobiliseringspotential. Emellertid används båda typerna av membran ofta i blottingtekniker.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är ett nitrocellulosamembran
3. Vad är ett nylonmembran
4. Jämförelse sida vid sida -Nitrocellulose vs Nylonmembran
5. Sammanfattning
Vad är ett nitrocellulosamembran?
Nitrocellulosamembran är ett vanligt membranfilter i nukleinsyra- och proteinblottningstekniker. Det har en hög proteinbindande potential. Följaktligen används nitrocellulosamembran i stor utsträckning i western blotting-teknik. Nitrocellulosamembran är kompatibla med alla hybridiseringstekniker och uppvisar överlägsen bindningskapacitet utan störningar. Nitrocellulosamembran är naturligt hydrofila. De gör hydrofil interaktion med molekyler och immobiliserar dem effektivt på membranet. Kommersiella nitrocellulosamembran finns i två porstorlekar: 0,45 och 0,2 um.
Figur 01: Nitrocellulosamembran som används vid western blotting
Vad är ett nylonmembran?
Nylonmembran är en annan typ av kommersiellt membran som används i blottingtekniker. Det används alternativt med nitrocellulosamembran för södra och norra blotting. Nylonmembran är idealiska för södra blotting än nitrocellulosa på grund av deras höga affinitet för bindning med DNA. På grund av flera unika egenskaper hos nylonmembran använder forskare vanligtvis nylonmembran för södra och norra blotting istället för över nitrocellulosamembran. Nylonmembran rekommenderas också för strippning och reprobning, till skillnad från nitrocellulosa.
Figur 02: Nylonmembran som används för södra blotting
Vad är skillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran?
Skilja artikeln mitt före bordet
Nitrocellulose vs nylonmembran |
|
| Nitrocellulosamembran är spröda. | Nylonmembran är mindre spröda. |
| Hantering | |
| De är svåra att hantera. | De är lätta att hantera. |
| Reprobing | |
| Ostödda nitrocellulosamembran är svåra att repröva. | Det är enkelt att reprobera med nylonmembran. |
| Kompatibilitet med olika lagringsförhållanden | |
| Nitrocellulosamembran har mindre hållfasthet för att motstå olika lagringsförhållanden. | Nylonmembran reagerar mer robust på olika lagringsförhållanden. |
| Använda sig av | |
| Prewetting krävs. | Förfyllning krävs inte för nylonmembran. |
| Hydrofil natur | |
| Nitrocellulosamembran är hydrofila till sin natur men är mindre hydrofila än nylonmembran. | De är mycket hydrofila till sin natur. |
| Immobiliseringspotential | |
| Nitrocellulosamembran har mindre affinitet för nukleinsyror. Men det har hög affinitet för proteiner. | Nylonmembran har en hög bindningspotential med nukleinsyror än nitrocellulosamembran. |
Sammanfattning - Nitrocellulose vs Nylon Membrane
Nitrocellulosa och nylonmembran är specialark som används i blottingteknik för att reproducera bandmönstret på gelén. De möjliggör möjligheten att detektera en specifik sekvens eller ett protein från blandningarna genom att immobilisera dem på membranet. När molekylerna väl har immobiliserats på membranet kan de användas som ett substrat för hybridiseringsanalys med märkta sonder. Nitrocellulosamembran används ofta för proteindetektering i western blotting-teknik på grund av dess höga bindningsaffinitet med proteiner. Nylonmembran används ofta för södra och norra blotting. Detta är skillnaden mellan nitrocellulosa och nylonmembran.
