Nyckelskillnad - DNA vs RNA-extraktion
Studiet av DNA och RNA är viktiga aspekter för att förstå de grundläggande begreppen molekylärbiologi, bioteknik och genetik. Extraktion av ren DNA- och RNA-prover är nödvändig för att utföra experimentella förfaranden under dessa studier. Huvudskillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion är att DNA-extraktionsprocessen renar DNA medan RNA-extraktion renar RNA. DNA-extraktionsprocessen har tre olika steg: celllys och katabolism av membranlipider och proteiner, klumpning av kataboliter genom koncentrerad saltlösning och utfällning av DNA med etanol. Trestegsförfarandet kan bestå av två valfria steg. RNA-reningsprocess består av fyra olika steg: tillsats av guanidiumtiocyanat för celllys, proteindenaturering inklusive ribonukleaser,separering av RNA genom tillsats av kloroform och fenol och tvättning av fällningen med användning av etanol.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är DNA-extraktion
3. Vad är RNA-extraktion
4. Likheter mellan DNA och RNA-extraktion
5. Jämförelse sida vid sida - DNA vs RNA-extraktion i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är DNA-extraktion?
DNA-extraktion är en fysisk och kemisk process som används för att rena DNA från ett prov. DNA-extraktion är en viktig aspekt i samband med molekylärbiologi och kriminalteknik. Processen består av tre grundläggande steg. Inledningsvis bör cellerna av intresse erhållas. Därefter underlättas celllys för att bryta cellmembranet, vilket öppnar cellen och exponerar cytoplasman tillsammans med DNA. Ytaktiva medel eller andra detergenter kan användas för att lysera lipiderna från cellmembranet medan de närvarande proteinerna kataboliseras av proteaser. Detta är ett valfritt steg. När cellen har lyserats underlättas klumpning av de kataboliserade molekylerna genom koncentrerade saltlösningar. Det följs av centrifugering av lösningen som separerar skräpklumparna från DNA. I detta skede,det differentierade DNA blandas med de reagenser och salter som används under cellcykeln.
Figur 01: DNA-extraktion
För att rena det ytterligare kan följande steg användas. En metod är etanolutfällning, vilket innebär att iskall etanol blandas med det separerade DNA-provet. DNA är olösligt i alkohol och producerar därmed en pellet på grund av aggregeringen av DNA-molekyler tillsammans. Natriumacetat tillsättes i denna process för att öka utfällningsgraden genom att öka jonstyrkan. Förutom etanolutfällningsprocessen kunde fenol-kloroformextraktionsprocess också induceras för detta. I denna metod denaturerar fenol proteinerna som finns i provet. När de väl centrifugerats kommer denaturerade proteiner att förbli i den organiska fasen medan DNA-molekylerna som blandas med kloroform kommer att finnas i vattenfasen. Kloroform tar bort fenolresterna. När extraktionen är klar,DNA hålls upplöst i TE-buffert eller ultrarent vatten.
Vad är RNA-extraktion?
RNA-rening är en process genom vilken RNA renas från ett biologiskt prov. På grund av närvaron av ribonukleas i cellerna och vävnaderna är denna process komplicerad. Ribonukleasenzym har förmågan att snabbt bryta ner RNA. Ribonukleasernas kemiska natur är extremt stabil och det är svårt att inaktivera dem. Neutralisering av ribonukleaser är ett alternativ. Eftersom detta enzym förekommer i celler och vävnader utvecklas speciella tekniker för RNA-extraktion. Av de många metoderna är den vanliga metoden extraktion av guanidiniumtiocynat-fenol-kloroform.
Figur 02: RNA-extraktion
Guanidiniumtiocynat-fenol-kloroformextraktionsmetoden beror på centrifugering och fasseparation. Blandningen som ska centrifugeras består av det vattenhaltiga provet och en vattenmättad lösning som består av fenol och kloroform. När den väl centrifugerats består lösningen av en övre vattenfas och en lägre organisk fas under neutrala pH-betingelser (pH 7-8). RNA är närvarande i vattenfasen. Den organiska fasen består typiskt av proteiner lösta i fenol och lipider lösta i kloroform. Ett kaotropiskt medel (en molekyl som har förmågan att bryta vätebindningarna mellan vattenmolekyler) tillsätts; detta kallas guanidiniumtiocyanat. Detta medel har förmågan att denaturera proteiner som inkluderar ribonukleaser som kan bryta ned RNA och är involverat i celllys. Det separerar också rRNA från ribosomala proteiner. Det sista steget med RNA-rening är att tvätta utfällningen av vattenfasen med etanol. RNA kan också renas med flytande kväve.
Vad är likheterna mellan DNA och RNA-extraktion?
- Båda extraktionsprocesserna använder skadliga kemikalier som fenol och kloroform.
- Centrifugering är en viktig teknik för båda processerna.
- Etanol används för att tvätta fällningen och för att erhålla renat DNA eller RNA.
Vad är skillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion?
Skilja artikeln mitt före bordet
DNA vs RNA-extraktion |
|
| DNA-extraktion är en process som extraherar DNA från en organism eller ett prov. | RNA-extraktion är en process som extraherar RNA från ett prov. |
| Steg | |
| DNA-extraktionsprocessen består av tre olika steg med två valfria steg. | RNA-extraktionsprocessen består av fyra olika steg. |
| Reagenser | |
| Ytaktiva medel, proteaser (valfritt), alkohol, kloroform, fenol, natriumacetat används för DNA-extraktion. | Guanidiumtiocyanat, kloroform, fenol, etanol används för RNA-extraktion. |
Sammanfattning - DNA vs RNA-extraktion
DNA- och RNA-extraktion är viktiga aspekter av de experimentella procedurerna för studier av molekylärbiologi, genetik och bioteknik. Båda processerna involverar liknande reagens, men RNA-extraktion använder ett speciellt reagens som kallas Guanidium tiocyanat som minskar ribonukleasernas aktivitet. Detta är den största skillnaden mellan DNA- och RNA-extraktion.
Ladda ner PDF-version av DNA vs RNA-extraktion
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-versionen här Skillnaden mellan DNA och RNA-extraktion
