Nyckelskillnad - kloning vs subkloning
Kloning och subkloning är molekylära biologiska procedurer som skapar genetiskt identiska celler eller organismer som bär DNA eller gen som är av intresse. Kloning är en teknik som involverar insättning av den intresserade genen eller DNA: t i en vektor, replikering av den i en värdbakterie och produktion av celler eller organismer som är exakta kopior av den genetiska sammansättningen. Subkloning är en teknik som involverar insättning av genen av intresse, som redan är insatt i en vektor, i en sekundär vektor, replikering av den i en värdbakterie och produktion av genetiskt identiska kopior av celler eller organismer. Nyckelskillnaden mellan kloning och subkloning är att genen av intresse, när den en gång ligerats in i en vektor, vid kloning fortsätter kloningsprocessen medan, under subkloning,den redan klonade genen av intresse separeras från modervektorn och infogas igen i en mottagarvektor och fortsätter processen.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är kloning
3. Vad är subkloning
4. Jämförelse sida vid sida - Kloning vs subkloning
5. Sammanfattning
Vad är kloning?
Kloning är det förfarande som producerar genetiskt identiska organismer eller celler. I naturen sker kloning i medel för aseksuell reproduktion. När det inte finns någon genetisk rekombination eller förändring får dotterceller samma genetiska sammansättning av föräldern. Prokaryota och eukaryota organismer skapar kloner genom binär fission, spirande, mitos, etc. I molekylärbiologi är kloning av gener eller specifika fragment av DNA en populär metod för att studera strukturen och funktionen hos det specifika DNA-avsnittet.
Huvudsyftet med molekylär kloning är att göra miljoner kopior av genetiskt identiska celler eller organismer som bär DNA-fragmentet av intresse (huvudsakligen gener). Det skapar organismer med exakta genetiska kopior av en annan. I första hand klonas specifika gener i molekylära studier för att erhålla strukturell och funktionell information och för DNA-sekvensering. För produktion av specifika proteiner eller produkter i stor skala används också kloning i stor utsträckning.
Kloningsförfarande
De grundläggande stegen för kloningsförfarandet är som följer.
- Identifiering och isolering av genen av intresse. (Amplifiering av genen av intresse genom PCR).
- Restriktionsdigerering av genen av intresse (Restriktionsendonukleas skär genen).
- Restriktionsdigerering av vektor-DNA. (Vektor-DNA skärs också med samma restriktionsendonukleas).
- Insättning av genen i vektorn och bildning av den rekombinanta molekylen.
- Transformation av den rekombinanta vektorn till en värdbakterie.
- Isolering och identifiering av de transformerade bakterierna (plasmidvektorn bör innehålla en valbar gen, oftast en antibiotikaresistensgen för att screena transformerade bakterier).
- Rekombinant genuttryck inom värden.
Figur_01: Kloningsförfarande
Vad är subkloning?
Subkloning är ett förfarande för att flytta en gen av intresse från en vektor till en annan vektor för att se genens uttryck för att få genens önskade funktionalitet. I denna metod är två vektorer involverade; nämligen modervektor och destinationsvektor. Klonade insatser flyttas igen till en andra vektor under subkloning. Målet med att överföra genen från den första vektorn till den andra vektorn är att erhålla något som inte kunde göras av den första vektorn eller att separera en gen igen i det redan klonade DNA-fragmentet och uttrycka det ensamt. Restriktionsenzymer används i denna procedur i början.
Subcloning Procedure
De grundläggande stegen för subkloning är som följer.
- Med hjälp av restriktionsendonukleaser, separering av DNA av intresse i donatorplasmiden (modervektorn).
- Amplifiering av DNA av intresse med PCR.
- Rening av PCR-produkten (DNA av intresse) genom gelelektrofores.
- Öppning av mottagarplasmiden med samma restriktionsendonukleaser som används för att separera DNA av intresse i moderplasmiden.
- Ligering av DNA av intresse (gen) i mottagarplasmiden för att skapa den subklonade plasmiden.
- Transformation av den subklonade vektorn till en kompetent värdbakterie.
- Screening av transformerade celler.
- Rening av plasmid-DNA och användning för DNA-sekvensering eller expression av generna för att erhålla de önskade produkterna.
Subkloning utförs vid tillfällen då en gen isoleras från den klonade gruppen av gener eller när genen av intresse måste överföras till en användbar plasmid för att se den exakta funktionen hos genen av intresse.
Figur_02: Subkloningsförfarande
Vad är skillnaden mellan kloning och subkloning?
Skilja artikeln mitt före bordet
Kloning vs subkloning |
|
| Kloning är det förfarande som producerar genetiskt identiska organismer eller celler. | Subkloning är ett förfarande för att flytta en gen av intresse från en vektor till en annan vektor för att se genens uttryck för att få genens önskade funktionalitet. |
| Bearbeta | |
| Separera DNA av intresse från organismen och infogas i en vektor en gång och klonas | Redan klonat DNA separeras från den första vektorn och infogas i en andra vektor och klonas. |
| Infoga rörelse via vektorer | |
| Flyttar inte insatser (DNA av intresse) från en vektor till en annan vektor. | Flytta inlägg från överordnad vektor till destinationsvektor. |
Sammanfattning - Cloning vs Subcloning
Kloning skapar genetiskt identiska celler eller organismer med den insatta genen eller DNA av intresse. Det fortsätter genom separering och insättning av DNA av intresse i en vektor och expression i en värdbakterie. Subkloning delar liknande steg med kloning. Vid subkloning införs emellertid redan klonade DNA-fragment (gen av intresse) i en vektor och transformeras till en värdbakterie. Det är nyckelskillnaden mellan kloning och subkloning.
