Nyckelskillnad - Valbar markör vs reportergen
Genteknik används för att överföra viktiga gener från organismen till en annan organism. Införande av en främmande gen i en annan organisms genom och att den uttrycks i värdcellen är de svåraste stegen vid genöverföring. För att detektera framgången med transformationsprocessen används en selekterbar markör och en reportergen i den rekombinanta molekylen. En selekterbar markör är en DNA-sekvens eller en gen som uttrycker och väljer de transformerade cellerna från de icke-transformerade cellerna. En reportergen är en annan gen som används för att särskilja transformerade celler och för att kvantifiera eller detektera hur den insatta genen fungerar inom värden. Huvudskillnaden mellan selekterbar markör och reportergen är att den valbara markören används för att avskärma de icke-transformerade cellerna och för att signalera de transformerade cellerna medan reportergenen används för att kvantifiera nivån på genuttryck inom värden.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckeldifferens
2. Vad är valbar markör
3. Vad är reportergen
4. Jämförelse vid sida - Valbar markör vs reportergen
5. Sammanfattning
Vad är en valbar markör?
Vid genteknik sätts genen av intresse in i en lämplig vektor och transformeras till värdorganismer. Transformationen lyckas emellertid endast i de behöriga värdcellerna, och det finns en möjlighet för värdceller att avvisa upptaget av främmande DNA. Därför är differentiering av de transformerade och icke-transformerade cellerna viktigt för att fortsätta med ytterligare experiment. Därför införlivar forskare en valbar markörgen till vektor för enkelt val av transformerade celler från icke-transformerade celler. En selekterbar markör är en DNA-sekvens, speciellt en gen användbar vid identifiering av de transformerade cellerna. Denna markörgen uppvisar ett drag som passar ett artificiellt urval av transformerade celler från icke-transformerade celler på ett medium.
De vanligaste selekterbara markörerna som används i molekylärbiologi är antibiotikaresistenta gener. En antibiotikaresistensgen sätts in i vektorn och transformeras till värdceller, särskilt till värdbakterien. Det specifika antibiotikumet införlivas i bakteriens odlingsmedium. På grund av närvaron av den selektiva markören, under de selektiva förhållandena, kan endast celler som innehåller lämplig valbar markör överleva. Icke-transformerade celler kan inte växa i det antibiotikahaltiga mediet. Därför kan transformerade celler lätt identifieras på grund av den selekterbara markören som är antibiotikaresistent.
Gener som ger egenskaper för antimetaboliter, herbicider används som selektiva markörer vid kloning av vektorer i växtgenetik. Denna samtransformation av selektiva markörer till genetiskt modifierade organismer har dock negativa effekter på miljön och människan. Frisättningen av antibiotikaresistenta bakterier kan öka antibiotikaresistiviteten hos humana patogener. Det kan förorena produkten eller biomassan med antibiotika och kan förlora det selektiva trycket till följd av nedbrytning och inaktivering av antibiotika.
Figur 01: Plasmidvektor för genöverföring med valbar markör
Vad är en reportergen?
Reportergener är gener som möjliggör detektion eller mätning av det insatta genuttrycket. Dessa reportergener kan fästas till reglerande sekvenser av genen av intresse för att signalera expressionsplatsen eller nivåerna. Därför transkriberas de under expressionen av gener under samma promotor till en enda mRNA-sekvens och översätts sedan till ett protein som kan indikera nivån på genuttryck.
Reportergener är av olika slag och de innehåller visuellt identifierbara egenskaper som vanligtvis är involverade i fluorescerande och självlysande proteiner. Gener som kodar fluorescerande protein och enzymer, omvandlar osynliga substrat till självlysande eller färgade produkter genom att signalera det framgångsrika genuttrycket och ge möjlighet till kvantifiering av genuttrycket.
Figur 02: Reportergenuttryck
Vad är skillnaden mellan valbar markör och reportergen?
Skilja artikeln mitt före bordet
Valbar markör vs reportergen |
|
| Valbar markör är en typ av DNA-sekvens som hjälper till att skilja transformerade celler med icke-transformerade celler. | Reportergen är en gen som hjälper till att kvantifiera uttrycket av den önskade genen insatt i värdcellen. |
| Enheterna som produceras | |
| Gener kodas med egenskaper som hjälper till med artificiellt urval på växande media. | Gener är kodade med visuellt identifierbara egenskaper. |
| Användande | |
| Antibiotikaresistensgener, antimetabolitgener, herbicidresistensgener etc. är exempel för valbar markör. | Gener kodar för grönt fluorescerande protein, β-glukuronidas, kloramfenikolacetyltransferas, rött fluorescerande protein, etc. är exempel. |
Sammanfattning - Valbar markör vs reportergen
Valbara markörer tillåter transformerade celler att växa i selektiva medier doserade med speciellt antibiotikum eller herbicid. De används för tidigt urval av transformerade celler. Reportergener används för att kvantifiera expressionsnivån för den önskade insatta genen. De tillåter också differentiering av transformerade och icke-transformerade celler. Detta är skillnaden mellan selekterbar markör och reportergen. Både valbar markör och reportergen betraktas som viktiga markörer inom genteknik.
