Nyckelskillnad - YAC vs M13 Phage Vector
DNA-kloning är en viktig process som möjliggör förökning av viktiga DNA-fragment av organismer. Det kräver koppling av specifikt DNA med vektor-DNA för att skapa rekombinant DNA som förvandlas till värdorganismen. En vektor är en DNA-molekyl som beter sig som ett medel för att bära främmande genetiskt material till en annan cell eller organism. Den ska kunna replikera inuti värdorganismen och producera flera kopior av rekombinant DNA. Det finns olika typer av vektorer som används vid DNA-kloning. Jäst artificiell kromosom (YAC) och M13 fagvektor är två typer bland dem. Huvudskillnaden mellan YAC och M13 fagvektorn är att YAC är en artificiell kromosom som replikerar i jästceller medan M13 fagvektorn är ett enkelsträngat cirkulärt DNA av bakteriofag M13 som replikerar i E Coli-celler.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är YAC
3. Vad är M13-fagvektor
4. Jämförelse vid sida vid sida - YAC mot M13-fagvektor
5. Sammanfattning
Vad är en YAC-vektor?
YAC är en artificiellt byggd kromosom som har förmågan att bära ett stort segment av främmande DNA och replikera i jästcellerna. Den har centromer-, telomer- och autonomt replikerande sekvenser som är väsentliga för replikering och stabilitet. YAC bör också ha en selektiv markör eller markörer och restriktionsställen för att göra den till en effektiv kloningsvektor. Stora sekvenser från 1000 kb till 2000 kb kan införas i YAC och överföras till jäst.
Figur 01: YAC-vektor
Vad är M13 Phage Vector?
Bakteriofag M13 är ett virus som infekterar och replikerar i E Coli. Genomet hos M13-bakteriofagen är liten i storlek, cirka 6,7 kb. Det är ett enkelsträngat, cirkulärt och positivt sense-DNA. Detta virus infekterar specifikt E Coli-bakterier genom F pilus. När den väl kommer in i ssDNA i bakterien, syntetiserar den sin komplementära sträng och blir dsDNA eller den replikativa formen (RF) av M13. RF kan bete sig som en plasmid i värdorganismen. DsDNA replikeras inom E Coli och producerar ssDNA med nya fager. Dessa nya fager släpps kontinuerligt från E Coli utan att döda värdcellen. Infektionen saktar dock ner tillväxten av E Coli. dsDNA kan extraheras från bakterieceller och användas som vektorer vid DNA-kloning. De är kända som M13-fagvektorer. De kan lätt manipuleras och användas på samma sätt som plasmidvektorer.
Den inneboende infektionsförmågan hos dessa M13-fager tjänar som en god kvalifikation för att användas som en vektor vid genkloning. När M13 utvecklas till en vektor bör flera element införlivas i dess genom. De är en gen för lac repressor (lac I) protein, den operatör-proximala regionen av lac Z-genen, en lac-promotor och ett multipelt kloningsställe (polylinker). När dsDNA i M13 används som vektorer kan det behandlas som en plasmidvektor. Användningen av ssDNA M13 har dock fördelar vid DNA-sekvensering och platsriktad mutagenes.
Eftersom M13-fagvektorn bär flera kloningsställen i lacZ-regionen kan rekombinerade vektorer lätt identifieras genom den blå / vita koloniscreeningen på agarplattor innehållande IPTG och X-Gal. Blå plack som produceras på plattorna innehåller inte de rekombinerade fagerna. Därför kan fager med insatser väljas för kloningsändamålet.
Figur 02: Bakteriofag M13
Vad är skillnaden mellan YAC och M13 Phage Vector?
Skilja artikeln mitt före bordet
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC är en genetiskt konstruerad kromosom som har förmågan att bära ett stort segment av främmande DNA och replikera i jästcellerna. | M13 fagvektor är en virusvektor utvecklad av bakteriofag M13 som används för att införa främmande DNA i E Coli. |
| Ändamål | |
| YAC: er utformades för att klona stora fragment av genomiskt DNA i jäst. | M13-fagvektorer används för att införa främmande DNA i E Coli. |
| Infoga längd | |
| YAC kan innehålla genombaserade megabasstorlekar (1000 kb - 2000 kb). | Inläggets storlek är cirka 1500 bps. |
| Konstruktion | |
| YAC-DNA är svårt att rena intakt och kräver en hög koncentration för att generera YAC-vektorsystem. | Det sker via cyklisk fotosyntetisk elektronkedja. |
| Stabilitet | |
| YAC är instabil. | M13-fager kan enkelt extraheras. |
| Storlek | |
| Enzymer är större molekyler. | M13-fager är stabila än YAC. |
Sammanfattning - YAC vs M13 Phage Vector
YAC är ett artificiellt konstruerat vektorsystem som använder en specifik region av jästkromosom för att införa stora segment av genetiskt material i jästceller. M13 fagvektor är ett vektorsystem härledt från bakteriofag M 13 som använder E coli som värdorganism. Detta är den största skillnaden mellan YAC och M13 Phage Vector. Båda är lika användbara vid rekombinant DNA-teknik och genkloning.
