Nyckelskillnad - Paper vs Thin Layer vs Column Chromatography
Papperskromatografi, tunnskiktskromatografi och kolonnkromatografi är tre typer av kromatografiska tekniker. Nyckelskillnaden mellan papperskromatografi, tunnskiktskromatografi och kolonnkromatografi baseras på typen av stationär fas som används i kromatografitekniken. Papperskromatografi använder ett cellulosapapper som sin stationära fas, tunnskiktskromatografi använder aluminiumoxid eller kiselgel som sin stationära fas, medan kolonnkromatografi använder en kolonn packad med ett lämpligt matrismaterial som sin stationära fas.
I processen för separation och identifiering av biomolekyler som proteiner och kolhydrater är kromatografi en viktig biofysisk teknik som används. Kromatografi separerar föreningar baserat på löslighet, storlek och laddning. Baserat på separationsmekanismen använder kromatografi mekanismer såsom jonbyte, absorption, partition och storleksuteslutning och det finns tre kromatografiska tekniker; nämligen papper, tunt skikt och kolonnkromatografi. Papperskromatografi är baserad på fast-vätske-adsorptionen och lösligheten av föreningen, och den använder ett cellulosapapper som den stationära fasen. Tunnskiktskromatografi är baserad på fast-vätske-adsorption av molekyler. Den har en stationär fas som typiskt är gjord av aluminiumoxid eller kiselgel och den mobila fasen som är lösningsmedlet. Kolonnkromatografi använder en kolonn fylld med en matris som används för att separera molekyler huvudsakligen baserat på deras storlek, affinitet eller dess laddning.
INNEHÅLL
1. Översikt över kromatografi och nyckeldifferens
2. Vad är papperskromatografi
3. Vad är tunnskiktskromatografi
4. Vad är kolonnkromatografi
5. Likheter mellan papper, tunnt lager och kolonnkromatografi
6. Jämförelse vid sida vid sida - Papper vs tunn lager mot Kolonnkromatografi i tabellform
7. Sammanfattning
Vad är papperskromatografi?
Papperskromatografi är den enklaste typen av kromatografi som används och används inte för omfattande forskning. Det används främst i studentlaboratorier för att identifiera biomolekyler som aminosyror och kolhydrater som finns i blandningar. Papperskromatografi använder en stationär fas som är tillverkad med cellulosapapper eller Whatman-filterpapper och en mobil fas som vanligtvis framställs med organiska lösningsmedel som n-butanol etc. Den stationära fasen är mättad med vatten, vilket gör den stationära fasen flytande. När sålunda föreningarna upptäcks och får köras i närvaro av den mobila fasen, separeras de beroende på föreningarnas löslighet. Således, vid utvecklingen av kromatogrammet, kan färgning göras för att bestämma längden på varje förening. Retentionsfaktorn kan därmed beräknas.
Figur 01: Papperskromatografi
Papperskromatografi kan ytterligare klassificeras som stigande papperskromatografi och fallande papperskromatografi beroende på riktningen för det löpande lösningsmedlet.
Vad är tunnskiktskromatografi?
Tunnskiktskromatografi eller TLC är en vanlig teknik för att identifiera olika aminosyror som finns i en blandning eller för identifiering av proteiner. Separationstekniken baseras på adsorptionen av fast-vätska. Under tunnskiktskromatografi används en platta gjord av aluminiumoxid eller kiselgel som den stationära fasen. Lösningsmedelsblandningen varierar beroende på kravet och kan använda olika kombinationer av organiska föreningar såsom n-butanol, ättiksyra och vatten för att bereda lösningsmedlet. Föreningarna som ska separeras prickas på plattan och nedsänks i lösningsmedelsblandningen. När lösningsmedlet väl rör sig upp baserat på kapillärverkan som ges av plattan, rör sig föreningarna som ses på plattan också beroende på deras löslighet i lösningsmedlet.
Figur 02: tunnskiktskromatografi
Detekteringen av fläckarna efter kromatogrammet körs genom olika färgningsprocedurer. Vissa använder ninhydrinfärgning som är ganska giftig metod för färgning. Moderna tunnskiktskromatogram använder fluorescensmetoder för att visa kromatogrammet efter körningen. Beroende på avståndet den har rest kan retentionstiden för varje förening beräknas. Detta kan användas för att identifiera typen av separerad förening baserat på den använda blandningen. TLC används främst för att identifiera aminosyror i en proteinblandning och också för att separera olika typer av monosackarider som finns i en blandning.
Vad är kolonnkromatografi?
Kolonnkromatografi är en bred term som används för att beskriva många typer av kromatografitekniker som använder den kolonnbaserade separationsmetoden. I kolonnkromatografi används en fysisk kolonn med ett förpackningsmaterial för att separera föreningarna. Separationen kan baseras på olika fysikaliska egenskaper som föreningarna uppvisar. Dessa egenskaper kan vara laddning, storlek, 3D-konformation och bindningskapacitet etc. Kolonnen packad med matrismaterialet fungerar således som den stationära fasen och tvättbufferten som appliceras på kolonnen fungerar som den mobila fasen.
Om molekylerna separeras baserat på storleken förpackas förpackningsmaterialet på ett sätt som lämnar porer för att föreningarna ska gå igenom. Således elueras de större molekylerna som inte kan flöda genom porerna först, medan de mindre molekylerna tar mycket längre tid att eluera.
Figur 03: Kolonnkromatografi
Om molekylerna separeras baserat på deras laddning kommer den stationära fasen att innehålla antingen en anjon eller katjonbytare som föreningarna kommer att lockas till baserat på deras laddning. Således under tvättsteget elueras de icke-bundna föreningarna. Efter tillsats av elueringsbufferten elueras de bundna laddade föreningarna. Detekteringen av dessa elueringsmedel baseras mestadels på spektrofotometriska tekniker.
Vilka är likheterna mellan tunnt papper och kolonnkromatografi?
- All Paper Thin Layer and Column Chromatography tre tekniker används för separation av biomolekyler såsom aminosyror, proteiner och kolhydrater.
- Papperstunna lager- och kolonnkromatografitekniker har en mobil fas och en stationär fas.
- Paper Thin Layer och Column Chromatography-tekniker använder biofysiska mekanismer för separation.
Vad är skillnaden mellan tunnt papper och kolonnkromatografi?
Skilja artikeln mitt före bordet
Paper vs Thin Layer vs Column Chromatography |
|
| Papperskromatografi | Papperskromatografi är en kromatografisk teknik som använder för att separera föreningar baserat på vätske-vätske-adsorptionen och lösligheten av föreningen. Den använder ett cellulosapapper som sin stationära fas. |
| Tunnskiktskromatografi | Tunnskiktskromatografi är en annan kromatografisk teknik baserad på adsorption av fast-vätska av molekyler. Den har en stationär fas gjord av aluminiumoxid eller kiselgel och ett lösningsmedel som den mobila fasen, vilket är lösningsmedlet. |
| Kolonnkromatografi | Kolonnkromatografi använder en kolonn fylld med en matris som används för att separera molekyler huvudsakligen baserat på deras storlek, affinitet eller dess laddning. |
| Stationär fas | |
| Papperskromatografi | Papper av nitrocellulosa från Whatman används som den stationära fasen i papperskromatografi. |
| Tunnskiktskromatografi | Alumina eller kiselgel används som den stationära fasen av tunnskiktskromatografin. |
| Kolonnkromatografi | En kolonn packad med lämpligt förpackningsmaterial används som den stationära fasen i kolonnkromatografin. |
| Mobil fas | |
| Papperskromatografi | Rinnande lösningsmedel är den mobila fasen i papperskromatografin. |
| Tunnskiktskromatografi | Rinnande lösningsmedel är den mobila fasen i tunnskiktskromatografi. |
| Kolonnkromatografi | Tvättbuffert är den mobila fasen i kolonnkromatografin. |
| Mekanismer som används för separering | |
| Papperskromatografi | Papperskromatografi baseras på absorption av fast vätska. |
| Tunnskiktskromatografi | Tunnskiktskromatografi baseras på fast-vätskeabsorption. |
| Kolonnkromatografi | Kolonnkromatografi baseras på storleksexkludering, laddning och form. |
| Elueringsbuffert | |
| Papperskromatografi | Krävs inte av papperskromatografi. |
| Tunnskiktskromatografi | Krävs inte för tunnskiktskromatografi. |
| Kolonnkromatografi | Krävs i kolonnkromatografi. |
| Upptäckt | |
| Papperskromatografi | Färgning och genom att bestämma retentionsfaktorn. |
| Tunnskiktskromatografi | Färgning och genom att bestämma retentionsfaktorn. |
| Kolonnkromatografi | Spektrofotometrisk bestämning. |
Sammanfattning - Paper Thin Layer vs Column Chromatography
Papperskromatografi, TLC och kolonnkromatografi är separationstekniker som används för att separera biomolekyler såsom proteiner, aminosyror och kolhydrater (huvudsakligen monosackarider). Papperskromatografi använder cellulosapapper som den stationära fasen och separationsmekanismen baseras på adsorption av fast-vätska. TLC använder också adsorptionsmekanismer för fasta vätskor. Molekylerna är separerade på den stationära fasen, beroende på deras löslighet i den mobila fasen. Kolonnkromatografi använder fysiska egenskaper såsom storlek, form, laddning och molekylvikten för föreningen att separera. Kolonnen packad med matrismaterialet fungerar som den stationära fasen, medan tvättbufferten fungerar som lösningsmedelsfasen. Detta är skillnaden mellan ett papperstunt lager och kolonnkromatografi.
