Nyckelskillnad - Direkt vs Indirekt ELISA
En enzymbunden immunanalys (ELISA), även känd som enzymimmunanalys, är ett serologiskt test som detekterar antikroppar i blodet. Det används som ett diagnostiskt verktyg för att ta reda på om patienten har utsatts för en viss typ av virus eller ett annat infektiöst medel (antigen) och om kroppen har producerat antikroppar mot infektionen. ELISA kan också identifiera tidigare och nuvarande infektioner. Därför används ELISA ofta som ett förskärmningstest av läkarna före djupgående analys av sjukdomar. Detta test kan utföras i laboratoriet genom att ta ett blodprov från patienten. Det finns två typer av ELISA-test: direkt ELISA och indirekt ELISA. Huvudskillnaden mellan direkt och indirekt ELISA är att indirekt ELISA är känsligare och kräver tillsats av en sekundär antikropp medan direkt ELISA är mindre känslig och endast använder en primär antikropp.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är direkt ELISA
3. Vad är indirekt ELISA
4. Jämförelse sida vid sida - Direkt jämfört med indirekt ELISA
5. Sammanfattning
Vad är Direct ELISA?
ELISA är ett sjukdomsdiagnostiskt test som utförs för att identifiera förekomsten av specifika antigener eller antikroppar i blodet. Det görs som en plattanalys. Den använder antikroppar kopplade till enzymer som är lätta att analysera. Antigenernas närvaro i serumprovet binder till specifika antikroppar kopplade till enzymer. I det sista steget tillsätts ett specifikt substrat för att reagera med enzymet. Enzymet omvandlar substratet till en färgad eller signalproducerande produkt. Färgförändringen i det kemiska substratet avslöjar närvaron av en viss antikropp i serumprovet. Direkt ELISA-test använder endast en primär antikropp kopplad till enzymet. Efter bindning till antigenet byter det snabbt färg, vilket indikerar närvaron av det infektiösa medlet i blodet. Dock,intensiteten hos signalerna är svagare i direkt ELISA eftersom epitoperna är begränsade till bindning av antigenerna. Därför är direkt ELISA mindre känsligt jämfört med indirekt ELISA.
Figur 01: Direkt ELISA-test
Vad är indirekt ELISA?
ELISA kan utföras med användning av två typer av antikroppar, nämligen; primär antikropp och sekundär antikropp. Indirekt ELISA-verktyg använder båda typerna av antikroppar för att förstärka signalerna för bättre detektion. Indirekt ELISA-teknik utförs enligt följande.
- Plattorna inkuberas med antigener och tvättas för att blockera ospecifik bindning.
- Sedan tillsätts primära antikroppar och tvättas.
- Enzymkopplad sekundär antikropp tillsätts och tvättas.
- Ett substrat tillsätts och får reagera med enzymer.
- Signaler detekteras och närvaron eller frånvaron av det specifika antigenet i provet identifieras.
I indirekt ELISA-test kan flera sekundära antikroppar bindas till en enda primär antikropp. Sekundära antikroppar är kopplade till lättanalyserade enzymer. Därför kan en bindning ge en stark signal på grund av mer än en interaktion. Därför är indirekt ELISA känsligare än direkt ELISA. Indirekt ELISA kan dock ge ospecifika signaler på grund av korsreaktioner av sekundära antikroppar.
Figur 02: Indirekt ELISA-test
Vad är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA?
Skilja artikeln mitt före bordet
Direkt mot indirekt ELISA |
|
| Direkt ELISA är mindre känsligt jämfört med indirekt ELISA. | Indirekt ELISA är känsligare. |
| Tid tagen | |
| Direkt ELISA-test är en snabb process. | Indirekt ELISA är tidskrävande. |
| Användning av antikroppar | |
| Endast en typ av antikroppar (Primära antikroppar) används i direkt ELISA. | Primära och sekundära antikroppar används för indirekt ELISA. |
| Länk med enzymer | |
| Primära antikroppar är kopplade till enzymer. | Sekundära antikroppar är kopplade till enzymer. |
| Korsreaktivitet av andra antikroppar | |
| Direkt ELISA eliminerar korsreaktiviteten hos andra antikroppar. | Indirekt ELISA påverkas av korsreaktivitet av andra antikroppar. |
| Signaler | |
| Signalerna är svaga jämfört med indirekt ELISA. | Signalerna förstärks i indirekt ELISA. Därför är det lätt att upptäcka. |
Sammanfattning - Direkt vs Indirekt ELISA
ELISA är en biokemisk teknik som huvudsakligen används inom immunologi för att detektera närvaron av en antikropp eller ett antigen i ett blodprov hos en patient. Det kan utföras via två processer som kallas direkt eller indirekt ELISA. Direkt ELISA-test använder endast primära antikroppar för att detektera antigenet medan indirekt ELISA använder både primära och sekundära antikroppar. I direkt ELISA är primära antikroppar märkta medan i indirekt ELISA är sekundära antikroppar märkta. Detta är skillnaden mellan direkt och indirekt ELISA.
