Nyckelskillnad - T4 vs T7 DNA-ligas
DNA-ligas är ett viktigt enzym som används i molekylärbiologisk teknik. Det fungerar som ett molekylärt lim för att förena nukleotider genom att bilda fosfodiesterbindningar mellan nukleotider. Fosfodiesterbindningarna bildas mellan 3'-hydroxyländen av sockerdelen och 5'-ändfosfatgruppen. DNA-ligas är avgörande i replikationsprocessen för att förena Okazaki-fragmenten av den släpande strängen och under DNA-reparationsmekanismer och in vitro-kloningsexperiment för att förena den önskade genen av intresse för vektorgenomet. Det finns två huvudsakliga DNA-ligaser som för närvarande används av molekylärbiologer: T4- och T7-DNA-ligaser. T4 DNA-ligas är ett av de första enzymerna som isoleras från T4-bakteriofagen. T7 DNA-ligas, som är ett mindre protein, är ett enzym isolerat från T7-bakteriofagen. Detta är nyckelskillnaden mellan T4- och T7-DNA-ligaser.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckeldifferens
2. Vad är verkan av DNA-ligas
3. Vad är T4 DNA-ligas
4. Vad är T7 DNA-ligas
4. Likheter mellan T4 och T7 DNA-ligas
5. Jämförelse sida vid sida - T4 vs T7 DNA-ligas i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är DNA-ligasverkan?
DNA-ligering sker i en reaktion i tre steg. Det första steget är en nukleofil attack på alfa-fosfor av ATP som genererar en kovalent enzymadenylat-mellanprodukt i vilken AMP är kopplad till det slutliga sidokedjiga kvävet av lysin. I det andra steget inträffar en nukleofil attack på fosforet av enzymet adenylat genom det 5'-fosfatavslutade DNA-substratet, vilket frigör lysin och bildar DNA-adenylat. I det sista steget attackeras DNA-adenylat av 3'-OH av en annan DNA-sträng, vilket frigör AMP och förenar polynukleotiderna.
Vad är T4 DNA-ligas?
T4 Ligase var det första ligaset som isolerades och identifierades av Meselson, Weigle och Kellenberger och var det första kommersiella ligas som någonsin producerats. T4 DNA-ligas är ett ATP-beroende enzym som katalyserar fosfodiesterbindningsbildningen. Det är en enda polypeptidkedja med 487 aminosyrarester och har en molekylvikt på cirka 77 kDa. Det optimala pH-värdet för dess aktivitet ligger i intervallet 7,5 - 8.
Figur 01: T4 DNA-ligas
T4 DNA-ligas är, som namnet antyder, närvarande i bakteriofag T4 och isolerades när fag producerade enzymet efter infektion med E. coli. Enzymet ligerar dubbelsträngade DNA-duplexer med trubbiga ändar och fragmenten som ska bindas bör vara i närheten av varandra.
Vad är T7 DNA-ligas?
T7-ligas är 41 kDa-protein producerat av T7 Bacteriophage och isoleras genom infektion av E. coli-celler. Huvudfunktionen för T7-ligas är att ligera DNA-duplexer genom fosfodiesterbindningar och förena närliggande DNA-fragment under kloningsexperiment. Det optimala pH-värdet för T7 DNA-ligas ligger i intervallet 7,0 - 7,2. T7-ligas är ATP-beroende. T7-DNA-ligaser kan också glödga DNA- och RNA-hybrider, vilket ger upphov till onormala konformationer under transkription; emellertid är detta fenomen fortfarande under forskning av in vitro-studier.
Vad är likheterna mellan T4 och T7 DNA-ligas?
- T4 och T7 DNA-ligas deltar i en ligeringsreaktion genom annealing av DNA-duplexer genom fosfodiesterbindningsbildning mellan 3'OH-änden och 5'-fosfatänden av DNA-fragmentet.
- Båda enzymerna ligerar DNA-duplex med trubbiga ändar som ligger i närheten av varandra.
- Båda enzymerna är ATP-beroende.
- Dessa enzymer isoleras genom att infektera E. coli-celler med den speciella bakteriofagen.
-
Tillämpningar av båda enzymerna inkluderar:
- Molekylär kloning - för att ligera genen av intresse för vektorn
- DNA-reparation - för att reparera dubbelsträngade nischer
- In vitro DNA-replikering
- Ligaskedjereaktion
Vad är skillnaden mellan T4 och T7 DNA-ligas?
Skilja artikeln mitt före bordet
T4 mot T7 DNA-ligas |
|
| T4 DNA-ligas typ av DNA-ligas isolerat från bakteriofagen T4 och är involverat i ligering av intilliggande DNA-fragment via bildning av fosfodiesterbindning. | T7 DNA-ligas typ av DNA-ligas isolerad från bakteriofagen T7 och är involverad i ligering av intilliggande DNA-fragment via fosfodiesterbindningsbildning. |
| Proteinets storlek | |
| Storleken på T4 DNA-ligas är 77 kDa - större jämfört med T7 DNA-ligas. | Storleken på T7 DNA-ligas är 41 kDa. |
| Optimalt pH | |
| pH-intervall som fungerar T4 DNA-ligas är 7,5 - 8,0. | pH-intervall som fungerar T7 DNA-ligas är 7,0 - 7,2. |
Sammanfattning - T4 vs T7 DNA-ligas
DNA-ligaser är en viktig klass av enzymer som är involverade i molekylär kloning för att producera rekombinanta DNA-molekyler innehållande genen av intresse. Ligeringsreaktion är en energianvändande reaktion och det pågår nya forskningsstudier för att förbättra noggrannheten genom modulering av tillgängliga ligaser. T4- och T7-DNA-ligaser är två typer av viktiga DNA-ligasenzymer som används i molekylärbiologiska tekniker. T7-DNA-ligas är också ett resultat av forskning som baserades på det primära ligaset som isolerats från T4-infekterad E. coli. T7 visas mer effektivitet och noggrannhet för att utföra sin funktion på grund av dess mindre storlek. Detta är skillnaden mellan T4 och T7 ligas.
Ladda ner PDF-version av T4 vs T7 DNA-ligas
Du kan ladda ner PDF-versionen av den här artikeln och använda den för offlineändamål enligt citat. Ladda ner PDF-version här Skillnaden mellan T4 och T7 Ligase.
