Nyckelskillnad - Stacking Gel vs Separating Gel
Termerna staplingsgel och separeringsgel används för att förklara SDS-PAGE-tekniken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores är en laboratorieteknik som används för att separera proteinmolekyler baserat på deras molekylvikter. Teorin bakom tekniken är att proteiner med olika molekylvikter visar olika migrationshastigheter; molekyler med låg molekylvikt migrerar snabbare medan molekyler med hög molekylvikt migrerar långsamt. Mediet för migration är en gel. Det finns två typer av geler som heter staplingsgel och separeringsgel. Huvudskillnaden mellan staplingsgel och separeringsgel är att staplingsgelens pH är 6,8 medan separeringsgelens pH är 8,8.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckelskillnad
2. Vad är staplingsgel
3. Vad skiljer gel
4. Förhållandet mellan staplingsgel och separeringsgel
5. Jämförelse sida vid sida - Staplingsgel vs separeringsgel i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är staplingsgel?
Staplingsgel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. Staplingsgelén används för att förbättra upplösningen av elektrofores. Upplösningen ökar på grund av skillnaden mellan koncentrationerna av staplingsgel och upplösningsgel som påverkar proteinerna i provet. Eftersom koncentrationen av polyakrylamid i staplingsgel är låg är porstorleken högre. Detta hjälper också till att öka separationen.
Staplingsgelén är en lös polyakrylamidgel med stora porer på cirka 7% polyakrylamid. Dessa porer fungerar inte som en betydande barriär för stora proteinmolekyler. Därför påverkar denna gel något på rörligheten hos dessa proteiner. Detta gör separering beroende på proteinets rörlighet och storlek genom att koncentrera dem mellan två geler.
Figur 01: SDS-PAGE akrylamidgel
Stapelgelens pH är 6,8. Dess pH är surt än att lösa gel med 2 pH-enheter. Detta pH innebär en lägre jonstyrka och därmed ett högre elektriskt motstånd. Detta framkallar rörligheten hos proteiner än andra laddade partiklar som finns i gelén.
Vad är separationsgel?
Separera gel eller upplösningsgel av en SDS-PAGE-teknik är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av lågkoncentrerad stapelgel. Den separerande gelén innehåller en hög mängd polyakrylamid (10%). PH för denna gel bibehålls som pH = 8,8, vilket är en högre pH-nivå än staplingsgelens.
Figur 02: En gelelektroforesapparat
När proteinmolekylerna når separeringsgeln saktar migrationen av dessa molekyler ner eftersom separeringsgelén är en gel med hög koncentration med liten porstorlek som kan fungera som en betydande barriär för proteinmolekylernas rörelse. Denna saktning gör att de andra proteinerna migrerar långsamt för att komma ikapp, vilket resulterar i ett smalt, koncentrerat band mellan de två gelerna.
Vad är förhållandet mellan staplingsgel och separeringsgel?
Båda typerna staplingsgel och separerande gel används i samma apparat
Vad är skillnaden mellan staplingsgel och separeringsgel?
Skilja artikeln mitt före bordet
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Staplingsgel är en lågkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av mer koncentrerad upplösningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknik. | Separera gel eller lösa gel enligt en SDS-PAGE-teknik är en högkoncentrerad polyakrylamidgel som placeras på toppen av en lågkoncentrerad stapelgel. |
| Placering | |
| Staplingsgel placeras på den upplösande (separerande) gelén. | Separerande gel placeras på botten av behållaren som används för gelelektrofores. |
| Koncentration | |
| Koncentrationen av staplingsgel är hög. | Koncentrationen av separeringsgel är låg. |
| Polyakrylamidinnehåll | |
| Staplingsgel innehåller cirka 7% polyakrylamid. | Separerande gel innehåller cirka 10% polyakrylamid. |
| pH | |
| Stapelgelens pH är 6,8. | Separationsgelens pH är 8,8. |
| Porstorlek | |
| Stora porstorlekar finns i staplingsgel. | Små porstorlekar finns i separerande gel. |
| Upplösning | |
| Staplingsgel ger bättre upplösning. | Att separera gel ger en dålig upplösning. |
Sammanfattning - Stacking Gel vs Separating Gel
Staplingsgel och separeringsgel är två typer av polyakrylamidgeler som används för att få bättre separation av proteinmolekyler i ett givet prov. Skillnaden mellan staplingsgel och separeringsgel är att stapelgelens pH är 6,8 medan separationsgelens pH är 8,8.
