Nyckelskillnad - Varm mot kall trypsinisering
Varm och kall trypsinisering är två metoder som används vid enzymatisk uppdelning av celler i djurcellsodling. Huvudskillnaden mellan varm och kall trypsinisering, som namnen antyder, beror på temperaturen vid vilken trypsin tillsätts för celluppdelning. Varm trypsinisering sker under förhållanden med högre temperatur (36,5 - 37 0 C) medan kall trypsinisering sker under lågtemperaturförhållanden.
Under processen med primär cellodling av djurceller finns det tre huvudsakliga metoder som har använts och har visat sig vara framgångsrika. De tre metoderna inkluderar mekanisk uppdelning av celler, enzymatisk uppdelning av celler och den primära explanttekniken. Den enzymatiska uppdelningen av celler som leder till isolering av celler och det görs av det proteinnedbrytande enzymet trypsin. Därför kallas denna process för Trypsinization. Trypsinization kan göras under två olika förhållanden, nämligen Warm Trypsinization och Cold Trypsinization. Varm trypsinisering är metoden för att behandla cellerna med trypsin under varma förhållanden vid en temperatur av 36,5 - 37 0C. Kall trypsinisering är processen för trypsinbehandling som äger rum under kallare förhållanden, företrädesvis i is som håller mycket låga temperaturer.
INNEHÅLL
1. Översikt och nyckeldifferens
2. Vad är varm trypsinisering
3. Vad är kall trypsinisering
4. Likheter mellan varm och kall trypsinisering
5. Jämförelse sida vid sida - Varm mot kall trypsinisering i tabellform
6. Sammanfattning
Vad är varm trypsinisering?
Trypsinisering kan göras för att disaggregera de cellulära komponenterna för att isolera cellerna för att producera en primär cellkultur. Trypsin är ett proteinnedbrytningsenzym, och enzymblandningen som används vid trypsinisering kan vara antingen ett råextrakt eller en renad produkt. Råextraktet sägs vara mer effektivt vid proteinlys och cellupplösning eftersom det innehåller andra nedbrytningsenzymer.
Varm trypsinisering är den vanligaste enzymatiska metoden för celluppdelning som äger rum under förhållanden med högre temperatur. Före behandlingen genom trypsinisering hackas den önskade vävnaden i mindre bitar. Det underlättar den enkla uppdelningsprocessen. Den hackade vävnaden tvättas sedan i ett speciellt medium som kallas Dissection Basal Salt-mediet.
Efter avslutad tvättsteg omvandlas cellerna till en kolv innehållande det aktiva enzymet, vilket är trypsin. Eftersom denna teknik innebär ett varmt trypsiniseringsprotokoll placeras trypsinet vid en temperatur av cirka 37 ° C i cirka fyra timmar.
Figur 01: Trypsin
Innehållet blandas och omrörs med hjälp av centrifugeringsmetoder för att underlätta protokollet och för att påskynda uppdelningsprocessen. När den rekommenderade tiden har uppnåtts kan cellerna härledas från supernatanten. Cellerna härledda från supernatanten inkuberas sedan vid en speciell temperatur och tid.
Vad är kall trypsinisering?
Kall trypsinisering är den andra typen av trypsinization som sker under kalla förhållanden. I denna teknik placeras cellerna som hackas och tvättas i flaskor på is och sedan blötläggs med trypsin. Blötläggningsperioden är mycket längre - cirka 6 - 24 timmar.
Efter avslutad blötläggningsprocedur avlägsnas trypsinet från celllysatet och vävnadsstyckena inkuberas ytterligare vid 37 ° C under cirka 20 - 30 minuter. Uppdelningen av cellerna åstadkommes genom upprepad pipettering av vävnadsblandningen. Detta gör att cellerna kan dissocieras från membranet och komma till supernatanten. När cellerna väl är i supernatanten inkuberas de och odlas vid önskad temperatur och tidsperiod.
Den kalla trypsiniseringsmetoden har flera fördelar
- Högre utbyte av livskraftiga celler eftersom cellskador minimeras. Cellskadorna minimeras genom att inte använda centrifugeringssteg.
- Mycket bekväm metod.
- Mindre arbetskrävande.
Huvudbegränsningen för den kalla trypsiniseringsmetoden är att stora mängder inte kan användas i ett fall.
Vad är likheterna mellan varm och kall trypsinisering?
- Både varma och kalla trypsiniseringsprocesser använder enzymet trypsin för uppdelning av celler.
- Både varma och kalla trypsiniseringsprocesser används i cellodlingsprocedurer för uppdelning av celler.
- I både varma och kalla trypsiniseringsbehandlingsprocedurer härleds cellerna från supernatanten.
Vad är skillnaden mellan varm och kall trypsinisering?
Skilja artikeln mitt före bordet
Warm vs Cold Trypsinization |
|
| Varm trypsinisering är metoden för att behandla cellerna med trypsin under varma förhållanden vid en temperatur av 36,5 - 37 0. | Kall trypsinisering är processen för trypsinbehandling som äger rum under kallare förhållanden, företrädesvis i is som håller mycket låga temperaturer. |
| Protokoll | |
| De hackade vävnadsbitarna hålls kontinuerligt vid 37 ° C under hela proceduren. | De hackade vävnadsbitarna hålls initialt vid iskalla temperaturer och hålls sedan vid 37 °. |
| Temperatur | |
| Varm trypsinisering sker vid 36,5 - 37 0 | Kall trypsinisering sker vid iskalla temperaturer. |
| Tid förbrukad | |
| Mindre tid krävs för hela processen (cirka 4 timmar) av varm trypsinisering. | Längre tid krävs (cirka 6 - 24 timmar) för kall trypsinisering. |
| Utbyte av livskraftiga celler | |
| Låg i varm trypsinisering. | Hög i kall trypsinisering. |
| Användning av centrifugering | |
| Centrifugering krävs för uppdelning av celler vid varm trypsinisering. | Centrifugering krävs inte vid kall trypsinisering. |
| Initial vävnadsmängd för trypsinisering | |
| En större mängd vävnad kan användas vid varm trypsinisering. | En mindre mängd vävnad kan användas vid kall trypsinisering. |
| Cellskador | |
| Hög på grund av centrifugering i varm trypsinisering. | Mindre på grund av kall trypsinisering. |
Sammanfattning - Warm vs Cold Trypsinization
Trypsinisering är metoden för att använda det proteinnedbrytande enzymet trypsin för uppdelning och beredning av primära cellkulturer under cellodlingsprocessen. Det finns två huvudsakliga metoder för trypsinisering baserat på temperaturerna som används under proceduren. De är varma och kalla trypsinisering. Varm trypsinisering utförs vid 37 0 C, medan kall trypsinisering genomföres under is-kalla förhållanden. Även om kall trypsinisering tar längre tid för slutförandet, sägs det ha ett högre utbyte av livskraftiga celler. Detta beror på det faktum att cellskador minimeras vid kall trypsinisering eftersom den inte använder kraftiga centrifugeringssteg. Detta är skillnaden mellan varm och kall trypsinisering.
